1.培養(yǎng)材料

試劑：MatrigengeL Matrix、小鼠氣道上皮類器官培養(yǎng)試劑盒、組織解離試劑盒、潤洗液、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、DPBS、雙抗。

耗材：48孔細胞培養(yǎng)板、離心管（規(guī)格為1.5mL、15mL和50mL）、細胞培養(yǎng)皿（6cm）、移液器（規(guī)格為10μL、200μL、1000μL）、無菌吸頭（規(guī)格為 10μL、200μL 和1000μL）、無菌鑷子、無菌組織剪 、100μm細胞過濾器。

2.實驗前準備

（1）MatrigengeL Matrix 4℃化凍；

（2）小鼠氣道上皮類器官完全培養(yǎng)基的制備：將200μL Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)，40μL Mouse Airway Organoid Supplement C (250x) 加至 9.76mL Mouse Airway Organoid Basal Medium中，充分混合，配制成10mL小鼠氣道上皮類器官完全培養(yǎng)基。室溫平衡，可在2℃-8°C儲存，建議在兩周內(nèi)使用；

（3）準備足量添加1%雙抗的DPBS；

（4）配制10mL組織解離液，現(xiàn)配現(xiàn)用，37℃搖床混勻預熱，未用完消化液可放置-20℃保存1周（10mL基礎(chǔ)液加入500μL消化酶）。

3.類器官培養(yǎng)

（1）組織樣本收集：小鼠斷頸處死，表面噴灑酒精殺菌，在無菌條件下將氣管取出，放入4℃預冷的DPBS溶液中。

（2）組織清洗：用冰冷的DPBS清洗2~3次，將組織轉(zhuǎn)移到新的1.5mL EP管中，用無菌組織剪將組織剪成約0.5mm3的碎片。

（3）消化液消化：將剪碎的組織用適量的原代組織液消化液重懸于37℃，100rpm條件下的恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，消化30-60分鐘，每隔10分鐘觀察組織消化情況，待組織塊明顯分散，懸液較渾濁時，取適量組織消化懸液鏡檢，待懸液中有較多細胞團即可終止消化。若組織碎塊較大或消化不完全可適當延長消化時間，消化期間可以使用不同規(guī)格1mL的移液器吹打組織消化懸液，幫助充分消化。

（4） 終止消化：當鏡檢懸液出現(xiàn)大量氣管上皮細胞時，即表明消化完成，在消化完成的組織懸液中加入胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）至終濃度達 1%~5%以減緩消化作用，同時輕輕吹打5~10次。

（11）持續(xù)培養(yǎng)：將細胞培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，每1天于倒置顯微鏡下觀察類器官的生長狀態(tài)，每2~3天更換完全培養(yǎng)基，于倒置顯微鏡下拍照，記錄類器官的形態(tài)和分布。

1.為減少實驗誤差，對膽管類器官傳代后培養(yǎng)效果進行測評。

2.Brand C該批次基質(zhì)膠培養(yǎng)后兩次均有明顯的細胞貼壁現(xiàn)象，而模基基質(zhì)膠所培養(yǎng)的氣道上皮類器官細胞飽滿、邊緣清晰、幾乎沒有貼壁現(xiàn)象，該現(xiàn)象表明?；|(zhì)膠在支撐性能上，優(yōu)于Brand C基質(zhì)膠。

?；锘|(zhì)膠經(jīng)過嚴格的質(zhì)檢驗證，具備安全性高、濃度多樣性、批次穩(wěn)定性好、低內(nèi)毒素、無污染。在購買?；a(chǎn)品時，根據(jù)用戶個性化的需求對用戶進行最佳產(chǎn)品、貨號的推薦，以便用戶獲得性價比最高、效果最優(yōu)的產(chǎn)品。

進行類器官培養(yǎng)時，推薦使用低生長因子基質(zhì)膠與類器官專用基質(zhì)膠，低生長因子基質(zhì)膠是進行了低因子處理的。在天然基底膜基質(zhì)中含有微量生長因子，其中有EGF、IGF、VEGF這類促進細胞生長分化的因子，也有TGF-β這類可能促進細胞凋亡的因子。低生長因子型基質(zhì)膠減少干擾因子，能更好的進行人工誘導分化，而類器官專用基質(zhì)膠則是經(jīng)過多項附加測試驗證，確定效果脫穎而出的低生長因子基質(zhì)膠，培養(yǎng)效果穩(wěn)定而又出眾。